ELISA — просто и удобно
Когда животное инфицировано, его иммунная система реагирует, производя антитела против возбудителя болезни. ELISA (enzyme-linked immuno sorbent assay) ИФА (иммуноферментный анализ) или, точнее, ферментный имуносорбентний анализ — это иммунологический метод исследования предназначен для выявления определенных антигенов в реакции антиген-антитело.
Этот метод используют в основном для проведения широкомасштабного эпизоотического наблюдения и исследований при внедрении программ контроля болезней. Это — высокочувствительный, специфический, простой, быстрый и экономичный в исполнении метод лабораторных исследований, позволяет легко воспроизводить и интерпретировать результат.
Недавно разработаны новые варианты ИФА, содержащие неинфекционные реагенты на основе рекомбинантных белков вируса p32, p54 и pp62. Они также проявляют высокую чувствительность и специфичность при исследовании сывороток крови даже при низком ее качестве.
Если в крови животного выявлены специфические антитела к определенному возбудителю, это указывает, что животное было инфицировано. Однако самого возбудителя на момент исследования крови в организме животного может уже и не быть.
Метод ELISA можно использовать также и для наблюдения за состоянием здоровья животных в стаде, отслеживая наличие в их организме специфических антител. Весомым его плюсом является длительный период времени для выявления инфекции и вероятность идентификации животных, переболевших до этого. ELISA часто используют в «полевых условиях», поскольку он легкий в исполнении: антитела в крови относительно стабильны, а отбор и транспортировка образцов — простая процедура.
ELISA доступен уже более 20 лет и позволяет контролировать состояние здоровья животных в стаде, проявляя наличие специфических антител к возбудителям инфекций, которые могут сохраняться в крови животного в течение всей жизни, а также позволяет идентифицировать новую инфекцию в стаде.
Например, вирус гриппа свиней активно распространяется в стаде в течение 3-5-х суток, и, как правило, заболевание в этот период не идентифицируют. ELISA-диагностика позволяет выявлять возбудитель и наладить практики менеджмента таким образом, чтобы быстрее реагировать в случае повторного заболевания.
ПЦР — достоверность и скорость результатов
ПЦР (полимеразная цепная реакция) наиболее часто используемая технология для обнаружения вируса. Она требует профессиональных навыков и достаточного опыта как на стадии постановки реакции (чтобы не допустить ложно-положительного результата), так и на стадии пробо-подготовки (чтобы не контаминировать образцы). ПЦР является чрезвычайно чувствительной и специфической технологией обнаружения вируса путем амплификации вирусной ДНК из исследуемого образца.
Сейчас метод ПЦР широко используют референтные лаборатории для диагностики и окончательного подтверждения АЧС — исследовании образцов тканей и сывороток крови от животных с клиническими признаками болезни. Этот метод позволяет выявить вирус в крови больных животных уже с второго дня после заражения и в течение нескольких недель. Он базируется на применении праймеров комплементарных консервативной области генома АЧС и позволяет обнаруживать широкий диапазон известных изолятов вируса АЧС, включая гемадсорбирующие и негемадсорбирующие штаммы.
ПЦР-диагностику можно использовать и для исследования образцов низкого качества — малопригодных для исследований другими методами.
Есть два различных метода ПЦР-диагностики вируса АЧС. Для обоих необходимы пробо-подготовка и этап выделения ДНК перед непосредственным проведением ПЦР-исследований:
- Стандартная ПЦР: продукты реакции, полученные в результате амплификации вирусной ДНК, анализируются с помощью электрофореза в агаровом геле и УФ спектре света.
- ПЦР в режиме реального времени. Этот метод исследований предполагает использование специального оборудования для обнаружения флуоресцентного сигнала. Он имеет несколько преимуществ: анализ результатов в ходе реакции (реальном времени), возможность количественного определения вирусной ДНК, не требует проведения электрофореза. Дальнейшее секвенирование продуктов ПЦР позволяет подтвердить положительные результаты реакции, и определить генотип вируса при амплификации некоторых фрагментов генома вируса (ген p72, ген p54, центральный вариабельный регион — CVR).
Одно из преимуществ ПЦР диагностики — возможность выявления заражения животных на ранних стадиях заболевания, когда организм еще не выработал специфических антител.
Как и в случае с применением ELISA, результаты ПЦР-теста можно получить достаточно быстро (обычно в течение нескольких часов). Например, проверка спермы хряков на наличие вирусов продлится 5-6 часов.
По материалам журнала «Прибыльное свиноводство» №1 (43), февраль 2018